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生物验证的统计方法

附录VerificationⅣ生物验证的统计方法

一、一般规定

生物测定是一种借助包括整株植物,分离的组织,器官生物统计法,细胞和微生物在内的生物体来评估抗生素的生物活性的技术。它基于抗生素的毒理学作用和生物统计学作为一种工具。它使用特定的实验设计在特定条件下比较测试产品和等效标准品或参考产品形成的特定响应,并比较等效响应的剂量。计算或极限剂量引起的生物学反应程度,以确定受试产品杂质引起的效价,生物学活性或毒性。

生物验证的统计方法主要表达了应用生物验证时必须注意的基本原理,一般要求,实验设计和统计方法。品种生物学验证的具体实验条件和要求必须符合该物种生物学验证法的规定。

生物测定标准品中国药典规定的用于生物测定的所有品种均具有其生物测定标准品(S)。 S具有明显的效价,以效价单位(u)表示,其含义与相应的国际标准的效价单位一致。

测试产品测试产品(T)或(U)是用于测试其效价的样品,其有效成分应与标准产品基本相同。

AT或AU是T或U的标记数量或滴度。

等速剂量比较生物测定法是在相同的实验条件下,同时比较T和S对生物或其分离的器官和组织的影响,并计算它们的等速剂量比(R),测量T,PT的滴定度。

R是S和T的反应剂量(d

S生物统计法,dT)比,即R = d

S

/ dT。

M是S和T(x

S,xT)的差,即M = lgd

S

-lgdT = xS

-xT。 R = antilgM。

PT是通过验证测得的T的滴定度浓度。称为T的测定效价。通过用标记的T或效价AT的标记量(即PT = AT·R或PT = AT·antilgM)校准效价比(R)来获得。

在验证过程中,S根据标记的效价估算剂量,而T根据标记的量或效价(AT)计算剂量。注意调整T的剂量或调整标记的量或滴度,使相应的S和T剂量。组引起的反应程度相似。

生物学变异性控制生物学测试具有一定的实验偏差,其主要来源是生物学变异性。

因此,生物学测试必须注意对生物学变异的控制,或降低生物学变异本身,或使用合适的实验设计来减少生物学变异对实验结果的影响,以减少实验偏差。在控制生物变异中必须注意以下几点。

(1)生物来源,繁殖或栽培条件必须一致。

(2)关于影响实验偏差的条件和因素,应尽可能将实验设计用作因素水平限制,并且将所选的因素水平随机分配给每个组。体重,性别,凋落物,双圆盘和给药顺序都是因素,不同的体重是体重因素的水平,雌性是性别因素的水平,不同凋落物中的植物处于特定凋落物因素的水平,不同的双圆盘是在盘间因素的水平上,并且在管理顺序上在顺序因子的水平上,等等。对于由程度定义的水平(例如植物重量),选择水平时,相邻的水平与应该选择更多的植物,并且不应间隔跳过该水平。

(3)根据实验设计类型的要求对限制因素进行分组时,还必须严格遵循随机性原则。

误差项是指从实验结果的总变化中除去不同剂量和不同因素对变化的影响后的残留变化分量。残差变化量(表示为s 2)。由于实验设计类型的限制),分离出的变化分量或由于某种因子水平而可能无法分离的变化分量对变化的影响很小,分类为s2。但是,必须区分代理之间的差异。

误差项的大小会影响标准误差SM和置信度极限(FL)。

根据相关公式,使用不同的验证方法和实验设计类型来估算s2。

可靠性测试平行线验证要求在实验所用的剂量范围内,对数剂量响应(或响应函数)呈线性关系,并且测试产品和标准产品的直线应平行。可靠性测试是为了验证测试产品和标准产品之间的对数剂量反应关系是否与平行偏离线有明显偏离。对于没有明显偏离平行偏离线(在一定概率水平下)的实验结果,可以认为已经建立了可靠性。根据相关公式估算受试产品的滴度和可信度极限。

置信度限制和置信度限制率置信度限制(FL)标记验证结果的精度。 M的置信极限是M的标准误差SM与t值(t·SM)的乘积,使用95%的概率水平。 M + t·SM为可信度上限的上限; M-t·SM是可信度限制的下限。通过对数估计的R和PT的置信范围的下限和上限均在样本验证结果的真实结果范围之内,概率水平为95%。

R或PT的置信极限率(FL%)用R或PT的置信极限估算。效力的信誉

极限是置信极限的上限和下限之差乘以平均值(或效价)的2倍的百分比。

02%××?=

平均(或效价)

降低置信度限制

置信度上限FL

根据s 2的自由度(f)通过检查t值表获得用于计算可信度极限的t值。t值与f之间的关系如表1所示。

表1 t值表(P = 0. 9 5)

ftft 3 3. 18 14 2. 15 4 2. 78 16 2. 12 5 2. 57 18 2. 10 6 2. 45 20 2. 09 7 2. 37 25 2. 06 8 2. 31 30 2. 04 9 2. 26 40 2. 02 10 2. 23 60 2. 00 11 2. 20 120 1. 98 12 2. 18∞

1. 96

对于每种物种的验证方法,都有关于可信度限制率的规定。如果验证结果不符合要求,则可以减小植物重量或年龄的范围,或者可以调整测试产品的滴度或剂量。重复实验以降低置信极限率。

通过重复试验获得的同一批次试验产品的试验结果(包括FL%超过规定值的结果)可以根据试验结果的组合计算方法进行计算,得出PT和其FL%作为验证结果。

二、直接确定方法(省略)

三、定量响应平行线确定方法(省略)

四、综合估算实验结果

同一批次的测试产品重复n次,并获得n个测试结果。滴定度PT和其FL的平均值可以通过组合估计来计算。

参与组合估计的n个结果应为:

(1)每个实验结果都是独立而完整的。它是在相同的植物来源和实验条件下,同时与标准产品进行比较而获得的验证结果(PT)。

(2)每次验证的结果用标记的量或滴度(AT)校正后,取对数值(lgP)

T

)参与组合估算。

计算时,使lgPT = M

n次实验的结果总共有n M个值,并且χ2检验是根据公式(3 5)

χ

2

= ΣWM

2

∑∑W

WM 2

)(

(3 5)

f = n-1

公式中的

W是每个实验结果的权重,等于每个实验的SM平方的倒数,即

W

=

21M

S

(3 6)

根据公式(3 5)的自由度(f),查找χ2值表(表十二),得到20 5. 0)(fx查表值;当χ2

计算

该值大于20 5. 0)(fx。当查找表值时,认为n个实验结果是均匀的,可以根据公式(3 7), (3 8),(3 9))每个M MSM及其FL的加权平均值。

∑∑ =

W

WM M(3 7)

∑ =

W

S M 1

(3 8)

组合的估计自由度(f)是n个实验结果的s 2个自由度的总和。 f =Σfi,单击此处检查t值表(表一)获取t值。

M

FL = M±t·

(3 9)

T P及其可信度极限是根据公式(4 0)和(4 1))”估算的:

T

P =

antilg

M

(4 0)

T P的FL = antilg M±t·M S

(4 1)

FL%通过[8)公式估算。

当χ2的估计值小于20 5. 0)(fx查找表值)时,n次实验的结果不一致,可以使用以下方法进行组合估计。

(1)如果某些实验结果影响n个实验结果的均一性,则可以消除一些结果,并可以根据上式对剩余的均一结果进行组合和估计,但删除一些结果应符合“特定响应“拒绝”的要求。

(2)如果n次实验结果的不均匀性不受某些实验结果的影响,则使用公式(4 2)和(4 3))估算校准砝码W',如图所示在公式中(4 3)计算结果为负,您可以在其后删除加号

对于一项,计算近似值2

m

每个实验的

S和W'。将公式(3 7))中的公式[3 7)(3 8)用W'和∑W'替换为W'和∑W'来计算M和MS,然后按(3 9)公式, (4 0)公式,(4 1)公式用于估算M的FL,TP和FL。

2

21

m

M S S w + =

生物验证的统计方法

.30631

= f = 5,t = 2. 57

PT = antilg 1. 4130 = 2 5. 88(u / mg)

PT的FL = antilg(1. 4130±2. 57×0. 0180 7) = 2 3. 26〜2 8. 80(u / mg)

FL%=

%7 0. 1002 5. 88

22 3. 26

-2 8. 80 =××

五、符号

A SM计算公式AT测试产品的标记数量或滴定度B SM计算公式C缺失项所在列中的响应值之和Ci可靠性测试值的正交多项式D价格估算

21,s s d d…标准产品的每剂量

21,T T d d…每种剂量的受测物品

两个残值的F比,用于方差分析等。FL置信限Fl%置信限率f自由度

G缺失项的补充公式中除缺失项外的响应值之和为g回归的显着性系数

I相邻高剂量与低剂量之比的对数,I = lgr J1,J2 ...用于消除特定反应的J值KS和T的剂量组数和k的剂量组数·k或T

MS和T的对数响应剂量之差,即滴度比(R)的对数,M = lgR。

M = lgPT在组合估算中

m平行线确定方法的每个剂量组中的响应数或植物数n S和T响应数ns最小效应方法中的S响应数nT T-的数量最小影响方法P概率的响应

测得的PT和PU测试产品的滴度(T),(U)是RS和TR的等反应剂量的比值缺失项所在行的响应值之和r S和相邻的高,低剂量TS标准品的比例

S1,S2 ...平行线确定标准(S)的每个剂量组的响应值之和等于S的每个剂量组的∑y(k)

SM s 2的标准误差实验误差项

2

m

S组合估计T测试产品中实验之间的方差

T1,T2 ...平行线测量被测物质(T)的每个剂量组的响应值之和,等于T的每个剂量组的∑y(k)

t值用于估计可信度极限,请参阅表1 U测试产品的另一个符号

U1,U2 ...平行线测量被测产品(U)的每个剂量组的响应值之和,等于U的每个剂量组的∑y(k)

u被测产品的滴定度单位

滴定度估算值的V平行线确定,请参见表7 W与V相同

W组合估计中每个实验结果的权重W'组合估计中每个实验结果的权重WC权重系数nWC权重

x对数剂量,x = lgd

x S SS对数剂量或S log最小影响x T TT对数剂量或T log最小影响

在s x线性测量方法中,S组的最小对数效应的平均值

直接确定Tx时,T组y响应或其规定函数的对数最小效应的平均值

ya和ym特异反应组的两个极值∑之和

∑y(k)S和T的每个剂量组的响应值之和∑y(m)S和T的每个剂量组的每个块的响应值之和χ2卡方

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